При наличии течки у мышей в мазке обнаруживаются только сплошные массы клеток ороговевшего безъядерного эпителия. В период покоя в мазке обнаруживаются лейкоциты и ядерные эпителиальные клетки.
Реакцию течки можно подтвердить вскрытием подопытных мышей, при котором обнаруживают увеличение и гиперемию матки. При реакции на пролан необходимо для дополнительной проверки вскрыть одну из подопытных мышей и в случае положительного результата находят увеличение яичников, присутствие в них зрелых фолликулов, красных кровяных точек на месте вскрывшихся графовых пузырьков и даже желтых тел. Кроме того, хорошо заметны гипертрофия и гиперемия половых органов.
Минимальное количество гипофизарного или фолликулярного гормона, способное вызвать реакцию течки у самок-мышей, называют мышиной единицей.
У лошадей с 30-го дня жеребости можно попытаться использовать метод, основанный на обнаруживании в крови гормона пролана. Между 3 и 42 днями жеребости этот метод иногда дает неточные результаты, так как в этот период содержание пролана в крови незначительно (350–750 м. е. в литре крови). С 42-го по 100-й день жеребости количество гормона пролана в крови сильно повышается (до 100 000–130 000 м. е.), а потому в этот период реакция наиболее точная – дает верные результаты почти в 10а% случаев. После же 3 месяцев жеребости количество гормона пролана сильно снижается.
С 3 месяцев жеребости и до родов определение жеребости производят на основании обнаруживания в моче жеребой кобылы огромного количества гормона фолликулина, исчисляемое в десятках и даже сотнях тысячах мышиных единиц в литре моче. Правда, гормон фолликулин обнаруживается и нежеребых и в начале жеребости кобыл, но количество его исчисляется только в нескольких тысячах мышиных единиц в литре мочи. Таким образом, по разнице в количестве гормона фолликулина можно судить о жеребости кобылы.
Микроскопия мазков из влагалищной слизи. Слизь берут с шейки матки (лучше с ее устья) стерильным плотным ватным тампоном с помощью корнцанга. Эти тампоном делают ровные мазки на сухом, обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом в течение 5 минут, окрашивают краской Гимза (на 1 мл дистиллированной воды 2–г капли краски) на протяжении 25–30 минут, тщательно смывают краску, высушивают и микроскопируют.
В мазках из слизи, взятой у жеребых кобыл, находят значительное количество клеток мерцательного эпителия, слизевые шары голубого цвета, единичные клетки плоского эпителия и иногда незначительное количество лейкоцитов.
В мазках из слизи, взятой у нежеребых кобыл, обнаруживают большое количество лейкоцитов и клеток плоского эпителия, единичные клетки мерцательного эпителия. Шаров из слизи нет. Слизь на мазке лежит ровным слоем.
Биологическое исследование крови и мочи. В период беременности в крови и моче кобыл накапливается довольно большое количество гонадотропных (фолликулостимулирующий гормон – ФСГ и лютеинизирующий гормон – ЛГ) и гонадальных (фолликулин) гормонов, стимулирующих функциональную деятельность половых органов.
Диагностика жеребости по результатам биологического исследования крови или мочи основана на выявлении количественного содержания в них названных гормонов. Этот метод диагностики отличается высокой точностью (95–100%), но, несмотря на это, при массовых исследованиях на жеребость он применяется редко из-за сложности и дороговизны его выполнения.
Для выявления гормонов в крови и моче жеребых кобыл существуют следующие способы: 1) Колла и Харта, 2) Фридмана и Шнейдера, 3) Цондека и Ашгейма.
При изучении функционального состояния яичников некоторые авторы заменяют лапаротомию осмотром яичника через фистулу брюшной стенки.
Для этой же цели предложена пересадка яичника в переднюю камеру глаза кастрированных крольчих. При удачной операции, с ослаблением воспалительной реакции, роговица просветляется (в первые дни послеоперационного периода она мутнеет), и за привившимся яичником очень просто и удобно вести наблюдение.
После введения испытуемой сыворотки в ушную вену крольчих в трансплантате можно видеть кровоизлияния, через три дня – увеличение фолликулов, а через пять дней – ясную лютеинизацию.
Реакция Цондека и Ашгейма. Сущность реакции – выявление фолликулина в моче ил крови беременных.
У жеребой кобылы в моче фолликулина в сотни раз больше, чем в крови, поэтому при постановке реакции используют мочу. Содержание фолликулина в моче увеличивается с течением жеребости: в первые три месяца колеблется в пределах 300–800 МЕ, с третьего месяца до выжеребки достигает 28 000–500 000 и даже 1 000 000 МЕ в 1 л мочи.
Эти данные указывают на целесообразность применения фолликулиновой реакции преимущественно после третьего месяца жеребости, а в более ранней стадии – исследование на пролан.
Техника реакции . Мочу пропускают через бумажный фильтр, подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции (лакмус). Для освобождения от токсичных веществ к моче прибавляют равное количество эфира и тщательно взбалтывают. Эфир сливают, а мочу оставляют стоять открытой до испарения остатков эфира (пока не останется слабый запах). Обработка эфиром повышает активность фолликулина.
Лабораторными животными служат овариоэктомированные белые мыши (кастраты), выдержанные в течение двух недель после операции и проверенные на отсутствие течки. Можно использовать инфантильных самок мышей; у каждой из них окрасить шерсть на условном месте и в течение трех дней два раза в день вводить под кожу:
к а с т р а т а м
1-й мыши – 0,3 цельной мочи
2-й » – 0,2 » »
3-й » – 0,1 » »
4-й » – 0,1 мочи, разбавленной
водой в 2 раза
инфантильным
1-й мыши – 0,2 цельной мочи
2-й » – 0,1 » »
3-й » – 0,1 » »
4-й » – 0,1 мочи, разбавленной
водой в 2 раза
Если есть основание предполагать более поздние сроки жеребости, когда фолликулина в моче много, можно всем мышам вводить мочу, разбавленную водой в 2–3 раза.
Через 100 часов после первой инъекции (лучше с 70–80-го часа) из влагалищной слизи каждой мыши три раза в день изготовляют мазки. Для получения материала и приготовления мазков употребляют платиновые петельки. Прокаленную на спиртовке петельку погружают в дистиллированную воду и вместе с захваченной ею каплей воды вводят во влагалище. Для извлечения слизи петли проводят по слизистой оболочке легким скоблящим движением. Той же петлей слизь размазывают на поверхности предметного стекла. На одно стекло можно нанести 3–ж мазков. Каждый мазок помечают восковым карандашом тем номером, которым обозначена мышь.
Мазок высушивают на воздухе, фиксируют спиртом и окрашивают по Романовскому или просматривают под микроскопом без окраски, в затемненном поле зрения. Наличие в мазке безъядерных клеток (чешуек), указывающих на появление течки, расценивается как положительный диагноз. В сомнительных случаях можно вскрыть 1–2 мыши. Диагноз подтверждается обнаружением матки, увеличенной под влиянием фолликулина.
Реакция Колла и Харта. Пролан появляется в крови кобыл через 30–40 дней после начала жеребости в количестве 144 МЕ* в литре (в среднем). К 40–50-му дню жеребости количество пролана достигает 26 тысяч, к 90-му дню – 30–40 тысяч МЕ. С 90-го дня содержание в крови пролана начинает уменьшаться.
Практически выявление пролана в сыворотке крови кобыл может быть осуществлено в период между 40–120 днями жеребости (с половины второго до пятого месяца).
Тестобъектом служат инфантильные мыши (весом 6–8 г) или крысы (весом 20–28 г).
Из вены кобылы, подлежащей исследованию, берут около 50 мл крови и ставят в прохладное место для отделения сыворотки. Последнюю вводят под кожу трем мышам или крысам в дозах (мл):
1-й мыши . . . . 0,5
2-й » . . . . 0,3
3-й » . . . . 0,1
1-й крысе . . . . 1,0
2-й » . . . . 0,5
3-й » . . . . 0,3
Всего делают шесть инъекций в течение трех суток (по две инъекции в сутки).
На 4–5-й день после начала инъекций от подопытных животных 2–3 раза в день готовят мазки из влагалищной слизи и исследуют под микроскопом. Если кобыла была жеребой, то под влиянием имеющегося в крови пролана у инфантильных мышей или крыс происходит половое созревание – развитие фолликулов. С созреванием фолликулов образующийся в них фолликулин вызывает течку, и мазок состоит из безъядерных клеток (чешуек). Если картина не ясна, через 100 часов после начала инъекции мышей убивают. При наличии у кобылы жеребости у мышей удается установить увеличение рогов матки, а в яичниках – зрелые фолликулы, желтые тела или фолликулы, заполненные кровью.
Решающее значение имеют изменения яичников и матки, поэтому для суждения о реакции всех или некоторых мышей убивают или вскрывают.
Реакция Фридмана и Шнейдера. Объектом служат крольчихи весом 900–1200 г, то есть достигшие половой зрелости. Самки должны содержаться изолировано от самцов, а еще лучше и от самок.
Десять миллилитров сыворотки крови исследуемой кобылы вводят в ушную вену крольчихи. Через 36–48 часов после инъекции у крольчихи производят лапаротомию и осмотр яичников. После инъекции сыворотки на месте разорвавшихся фолликулов или обнаруживают фолликулы, полость которых заполнена кровью.
После осмотра яичников рану брюшной стенки зашивают. Через 2–3 недели эту же крольчиху можно использовать вторично (иногда одно животное удается использовать 5–6 раз). При повторных инъекциях следует иметь в виду возможность анафилаксии.
К преимуществам этой реакции относится укорочение срока ее до 48 часов, вместо 100 часов при методике Колла и Харта.
Диагностика беременности овец и коз
Анатомия и топография половых органов овец и коз.
Половые органы овец и коз анатомически отличаются от таковых крупных жвачных только меньшими размерами. Длина преддверия 4–5 см, влагалища 8–12 см. Шейка матки, у ярок длиной 3–5 см, у взрослых маток 5–7 см, имеет 8 хорошо выраженных поперечных складок слизистой оболочки, увеличивающихся по направлению к влагалищу. Последняя складка вдается во влагалище, образуя зев матки, по форме напоминающий рот рыбы.
Тело матки длиной 2–4 см переходит в сильно извивающиеся и суживающиеся к верхушкам рога длиной от 10 до 20 см, в зависимости от возраста и породы животного. На слизистой оболочке рогов 88–110 карункулов с углублениями в центре. В роге – плодовместилище карункулов больше, чем в роге свободном (Ч. А. Рзаев).
Межроговой желоб хорошо выражен. Яйцепроводы извилисты, длиной от 9 до 18 см. Яичники овальной формы, длиной 0,5–1,0 , шириной а,3–0,5 см, в стадию возбуждения увеличиваются до 2,2*2 см.
Методы диагностики.
Клинические методы диагностики беременности.
Рефлексологический метод. Выделяют специальный загон и в находящуюся там отару осемененных овец с 12-го по 19-й день (коз с 14-го по 22-й день) после осеменения выпускают самцов-пробников утром и вечером на 1–1,5 ч из расчета один-два пробника на 100 маток. Выявленная пробником охота свидетельствует о небеременном состоянии матки, а отсутствие охоты – о возможной беременности.
Метод пальпации живота
Выявить небеременное состояние у этих животных, а также беременность в первой половине ее развития наружным исследованием невозможно. Прощупать плод через брюшную стенку удается с 3-го месяца суягности. Животные перед исследованием должны быть выдержаны на голодной диете не менее 12 часов, чтобы облегчить отыскание матки с плодом.
При исследовании овец или коз на беременность необходимо учитывать то, что у них через брюшную стенку могут прощупаться почки. Правая почка овец и коз соприкасается с правой долей печени. Размер ее в поперечнике 8–12 см . Поэтому при исследовании на суягность, зная месторасположение почек и их величину, первоначально находят вверху под позвоночником твердые на ощупь и сравнительно подвижные почки (особенно у коз), а затем ниже прощупывают различной величины и формы твердые тела – плоды.
Для исследования овцу или козу ставят так, чтобы зад животного был несколько выше передней части туловища. При таком положении туловища животного кишечник и рубец смещаются к диафрагме, вследствие чего ослабевает внутрибрюшное давление и этим создаются условия для пальпации матки с плодом.
Для наружного исследования встают сбоку или позади овцы (козы) и концами пальцев обеих рук или концами пальцев одной руки и ладонью другой – сдавливают брюшные стенки под поясничными позвонками. При наличии плодов, они ощущаются в виде твердых подвижных тел.
Беременность у овец и коз можно диагностировать и другим способом. Для этого исследующий, присев слева возле животного подводит свою правую ногу, согнутую в коленном суставе, под живот овцы (козы) и плавно приподнимает коленом нижнюю брюшную стенку исследуемого животного вверх и вправо. Одновременно с этим правой рукой, без применения силы, прощупывает справа, через брюшную стенку, плоды.
В ряде случаев препятствием для пальпации плодов может быть сильное напряжение брюшных стенок. Для расслабления последних рекомендуется захватить рукой кожу над спинными позвонками и собрать ее в складку. Это делает или помощник или сам исследующий, в зависимости от способа исследования.
С конца 4-го месяца беременности пальцем, введенным в прямую кишку или во влагалище (прижимая его к одной из стенок таза), можно ощутить усиленную пульсацию или журчание задней маточной артерии.
У слабоупитанных овец с коротким шерстяным покровом иногда удается прощупать карункулы.
Ректально – брюшной метод. Исследование проводят с помощью пластмассового стержня толщиной 1,5 см, длиной около 50 см, один конец которого закруглен. Для определения беременности овцу кладут на стол или на наклонную плоскость так, чтобы задняя часть тела была выше передней (угол наклона примерно 45°). Закругленный конец стержня смазывают жиром и вводят в прямую кишку на глубину 30–35 см, продвигая стержень вдоль позвоночника. Ладонь свободной руки прикладывают к брюшной стенке рядом с выменем. После этого медленно производят веерообразные движения стержнем в брюшной полости и одновременно слегка надавливают им в направлении вентральной брюшной стенки. Этим обеспечивается беременной матки навстречу руке, приложенной к брюшной стенке, и матка с плодом пальпируется. При одноплодной беременности плод прощупывается чаще всего слева от стержня, а при двойне плоды обнаруживаются с обеих сторон от него. У небеременных овец стержень, не встретив сопротивления со стороны матки, касается непосредственно вентральной брюшной стенки и отчетливо нащупывается ладонью свободной руки.
По некоторым данным, ректально-брюшным методом можно определять суягность, начиная с 43-го дня после оплодотворения с точностью 73%, а с 56–70-го дня – с точностью до 100%. Метод легко выполним, исследование одной овцы занимает не более 1 мин. Недостаток метода – возможность повреждений слизистой оболочки прямой кишки.
Влагалищный метод. Во влагалище овцы (козы) вводят влагалищное зеркало (простерилизованное кипячением) и осматривают устье шейки матки. Наличие в нем большого количества густой слизи является характерным признаком беременности. Влагалищное исследование можно начинать после с 20–30-го дня после осеменения.
Во второй половине беременности (особенно с 4-го месяца) пальцем, введенным во влагалище или прямую кишку и приложенным к боковым стенкам тазовой полости, можно обнаружить одностороннюю или двустороннюю вибрацию («жужжание») задних маточных артерий. У небеременных самок эти артерии слабо подвижны и пульсация их не прощупывается.
Ультразвуковой метод. Для определения беременности у овец и коз, а также у свиней и сук за рубежом используют ультразвуковые приборы различных типов. Действие большинства из них основано на эффекте Доплера: различном отражении ультразвука от неподвижных объектов и движущихся частиц; отражаясь от движущегося вещества, ультразвук меняет свою частоту. С помощью таких приборов можно обнаружить перемещение крови в пуповине или сердцебиение плода.
В зависимости от применяемой модели прибора овцу (козу) для определения беременности удерживают в стоячем положении, сидячем или лежачем положении, ультразвуковую головку прибора прикладывают к бесшерстным участкам живота у основания вымени или вводят в прямую кишку. Сигналы с аппарата, подтверждающие жизнедеятельность плода (наличие у него сердцебиений), прослушиваются через наушники или наблюдается на осциллоскопе. Суягность диагностируется с 65–70-го дня с точностью до 100%, а при использовании некоторых моделей приборов с 43–46 дня с точностью до 95%. Для исследования одной овцематки требуется 1–3 мин. Животных, давших отрицательные результаты, целесообразно через 10 дней проверить повторно.
Ультразвук можно использовать для определения числа плодов, контроля их состояния, а также для предсказания даты родов. Поскольку частота пульса плодов постепенно снижается (с 200–240 ударов в минуту за 60–80 дней до родов до 120–160, когда до ягнения остается 20 дней), то можно определить время, оставшееся до ягнения, руководствуясь формулой: y=0,7x–88 , где y – теоретический срок до родов в днях; x – частота пульса плода в минуту.
Принцип действия некоторых ультразвуковых приборов основан на том, что ткани с различной плотностью по-разному поглощают и отражают ультразвуковую энергию, что позволяет установить наличие в матке жидкости. При этом точность определения суягности в разные сроки составляет: до 30-го дня суягности – 38%, между 31-м и 60-м днем – 67, между 61-м и 90-м днем – 98 и между 91-м и 120-м днем – 96%.
Большинство приборов портативные, поэтому их можно использовать в любых животноводческих помещениях. К недостаткам метода относится сравнительно поздний срок определения суягности. Из-за высокой стоимости аппаратуры метод применяется только в научно-исследовательской работе.
Лабораторные методы.
Одним из наиболее простых лабораторных методов является исследование цервикальной слизи. Пробы слизи у овцы
9-09-2015, 00:23