Отдельно исследование не назначается, а проводится в комплексе с определением агрегации тромбоцитов с АДФ и адреналином.
Агрегация тромбоцитов с адреналином в плазме
Кривая, регистрируемая при записи адреналининдуцированной агрегации, имеет две волны. Адреналин при контакте с тромбоцитами взаимодействует с α2а -адренорецепторами, что вызывает ингибирование аденилатциклазы. Не исключено, что механизм, лежащий в основе реализации эффекта адреналина и развития первой волны агрегации, не зависит от образования ТХА2 , реакции высвобождения или синтеза фактора агрегации тромбоцитов, а связан со способностью этого проагреганта прямо изменять проницаемость клеточной мембраны для Са2+ . Вторичная агрегация при индукции процесса адреналином является итогом развития реакции высвобождения и продукции тромбоксана А2 .
Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой в плазме
Арахидоновая кислота является природным агонистом, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и Н2 и тромбоксана А2 и включает активацию как фосфолипазы C с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2 , что непосредственно приводит к либерации эндогенной арахидоновой кислоты.
Активация тромбоцитов под действием арахидоновой кислоты происходит достаточно быстро, поэтому кривая, характеризующая этот процесс, чаще носит одноволновый характер.
Для индукции агрегации тромбоцитов арахидоновая кислота используется в концентрациях 1*10-3 – 1*10-4 М. При работе с арахидоновой кислотой следует учитывать, что на воздухе это вещество очень быстро окисляется.
Рекомендуется выполнение агрегации с арахидоновой кислотой в случаях использования лекарств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.
Агрегация тромбоцитов с ристоцетином в плазме
Активность фактора Виллебранда в норме – 58 - 166 %.
Фактор VIIIсвертывания плазмы - антигемофильный глобулин А - циркулирует в крови в виде комплекса из трех субъединиц, обозначаемых
· VIII-к (коагулирующая единица),
· VIII-АГ (основной антигенный маркер) и
· VIII-фВ (фактор Виллебранда, связанный с VIII-АГ).
Считают, что VIII-фВ регулирует синтез коагуляционной части антигемофильного глобулина (VIII-к) иучаствует в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе.
При болезни Виллебранда снижается активность как VIII-фВ, участвующего в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе и являющегося основным маркером комплекса фактора VIII(фактор Виллебранда), так и VIII-к. При этом заболевании нарушается ристоцетинагрегация тромбоцитов.
Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином в плазме применяется для количественной оценки фактора Виллебранда. Установлена линейная зависимость между степенью ристоцетиновой агрегации и количеством фактора Виллебранда. При болезни Виллебранда отмечается нарушение ристоцетинагрегации при нормальном ответе на воздействие АДФ, коллагена и адреналина. Нарушение ристоцетинагрегации выявляется и при макроцитарной тромбодистрофии Бернара-Сулье (отсутствие на мембране тромбоцитов рецепторов ристоцетиновой агрегации). Дифференциальным тестом является тест с добавлением нормальной плазмы: при болезни Виллебранда после добавления нормальной плазмы ристоцетинагрегация нормализуется, в то время как при синдроме Бернара-Сулье нормализации не происходит.
Исследование может использоваться в дифференциальной диагностике между врожденной гемофилией А (недостаток фактора VIII) и болезнью Виллебранда. При гемофилии резко снижено содержание VIII-к, а содержание VIII-фВ находится в пределах нормы. Эта разница приводит к различию клинических форм геморрагического диатеза: гематомная форма возникает при гемофилии, а петехиально-гематомная - при болезни Виллебранда.
Плазменный (коагуляционный) гемостаз
Оценка первой фазы плазменного гемостаза - образования протромбиназы
Показатели, характеризующие первую фазу:
1.Время свертывания крови.
2.Активированное частичное тромбопластиновое время.
3.Активность XII фактора.
4.Активность XI фактора.
5.Активность IX фактора.
6.Активность VIII фактора.
7.Активность X фактора.
Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ)
Нормальные показатели АЧТВ – 25 - 35 с.
АЧТВ - один из наиболее ценных общих тестов для получения представления о системе свертывания крови. АЧТВ - тест, выявляющий исключительно плазменные дефекты внутренней системы активации X фактора в первой (образование протромбиназы) фазе свертывания крови. Удлинение АЧТВ отражает дефицит плазменных факторов (кроме VII и ХШ) и наблюдается при их значительном (ниже 25 - 10%) снижении. Удлинение АЧТВ указывает на преобладание гипокоагуляции.
Причины, приводящие к удлинению АЧТВ:
· нарушение показателей АЧТВ при нормальном протромбиновом и тромбиновом времени наблюдается только при дефиците или ингибиции факторов VIII, IX, XI, XII, а также прекалликреина и высокомолекулярного кининогена. Из этих форм патологии наиболее часто встречаются и сопровождаются выраженной кровоточивостью дефицит и/или ингибиция факторов VIII и IX, что характерно для гемофилии А и В, а также дефицит фактора Виллебранда. Более редко в крови ранее здоровых лиц появляются иммунные ингибиторы фактора VIII;
· замедление свертывания как в АЧТВ, так и протромбиновом тесте при нормальном тромбиновом времени и уровне фибриногена наблюдается при дефиците факторов X, V, II, а также при воздействии непрямых антикоагулянтов;
· удлинение протромбинового времени при нормальных показателях АЧТВ и тромбинового времени характерно только для дефицита фактора VII;
· удлинение АЧТВ, протромбинового и тромбинового времени наблюдается при глубокой гипофибриногенемии, лечении активаторами фибринолиза. Удлинение времени свертывания только в тромбиновом тесте характерно для дисфибриногенемии и нарушений полимеризации фибрин-мономеров;
· афибриногенемия и гипофибриногенемия, как врожденные, так и связанные с тяжелыми поражениями печени, сопровождаются удлинением АЧТВ;
· при проведении гепаринотерапии удлиняются АЧТВ, протромбиновое и тромбиновое время. Важное значение придается определению АЧТВ при лечении гепарином. Известно, что больные могут быть с повышенной и пониженной чувствительностью к гепарину. Окончательно вопрос толерантности к гепарину может быть уточнен путем повторного определения АЧТВ за 1 ч до очередного введения гепарина. Если АЧТВ в это время окажется удлиненным более чем в 2,5 раза по сравнению с нормой, констатируют повышенную чувствительность к гепарину, снижают дозу гепарина или увеличивают интервал между его введениями;
· удлинение АЧТВ может свидетельствовать о наличии у пациента волчаночного антикоагулянта при отсутствии нарушений других показателей коагулограммы.
Укорочение АЧТВ свидетельствует о преобладании гиперкоагуляции и отмечается в первой (гиперкоагуляционной) фазе острого ДВС-синдрома.
Фактор XII (Хагемана)
Активность фактора XII в плазме в норме – 65 - 150%.
Фактор XII - фактор контакта Хагемана - сиалогликопротеид, активирующийся коллагеном, контактом с чужеродной поверхностью, адреналином и рядом протеолитических ферментов (в частности плазмином).
Фактор XII - инициатор внутри сосудистой коагуляции; кроме того, фактор ХIIа переводит прекалликреины плазмы в ферменты калликреины. Активный фактор XII служит активатором фибринолиза.
При дефиците фактора XIIв коагулограмме увеличено время свертывания крови и АЧТВ без признаков кровоточивости.
В клинической практике определение активности фактора XIIиспользуется для диагностики врожденного дефицита этого фактора. Дефицит фактора XII должен быть заподозрен всегда, когда определяется значительное удлинение времени свертывания крови и АЧТВ. В большинстве случаев дефект Хагемана наследуется по аутосомно-рецессивному типу. Между степенью нарушения свертываемости крови и дефицитом фактора XII имеется строгое соответствие: при резко выраженной гипокоагуляции уровень активности этого фактора в плазме не превышает 2% и чаще бывает ниже 1%; при умеренном нарушении свертываемости он колеблется от 3 до 9%. Если активность фактора XIIв плазме составляет 10% и более, время свертывания крови, АЧТВ и другие тесты нормализуются.
Приобретенная недостаточность фактора XII характеризует коагулопатию потребления вследствие диссеминированного внутрисосудистого свертывания.
Фактор XI (антигемофильный фактор С)
Активность фактора XI в плазме в норме – 65 - 135 %.
Фактор XI - антигемофильный фактор С - гликопротеид. Активная форма этого фактора (ХIа) образуется при участии факторов XIIа, Флетчера и Фитцжеральда-Фложе. Форма ХIа активирует фактор IX. При дефиците фактора XI в коагулограмме удлинено время свертывания крови и АЧТВ.
В клинической практике определение активности фактора XI используется для диагностики гемофилии С и для того, чтобы отдифференцировать дефицит фактора XI от дефицита фактора XII.
Врожденную недостаточность фактора XI называют болезнью Розенталя, или гемофилией С. Это наследственное заболевание чаще выявляют у евреев и наследуется по аутосомно-рецессивному типу. Болеют мужчины и женщины. Кровоточивость в основном отмечается после травм и операций.
Приобретенная недостаточность фактора XI отмечается при ДВС-синдроме вследствие его потребления, при приеме антикоагулянтов, при внутривенном введении декстрана.
Минимальный гемостатический уровень активности фактора XI в крови для выполнения операций – 15 - 25%, при более низкой активности риск развития послеоперационных кровотечений чрезвычайно велик. Минимальный гемостатический уровень активности фактора XI в крови для остановки кровотечения – 5 – 15%, при более низкой активности остановка кровотечения без введения больному фактора XI невозможна.
Фактор IX (Кристмас-фактор)
Активность фактора IX в плазме в норме – 60 - 140 %.
Фактор IX (Кристмас-фактор, антигемофильный глобулин В) относится к β-глобули-нам, принимает активное участие в первой фазе (протромбиназообразование) плазменного гемостаза. Фактор IX образуется в печени. Поэтому его содержание в крови больных гепатитами, циррозами печени, а также у принимающих производные дикумарина и индадиола снижается. Выработка фактора IX регулируется геном в Х-хромосоме, в локусе, отстоящем от гена ключевого фермента синтеза фактора VIII. Этот ген мутирует в 7 - 10 раз реже, чем ген фермента синтеза фактора VIII. Вот почему из всех гемофилии гемофилия А обнаруживается у 87 - 94% больных, а гемофилия В (врожденный недостаток фактора IX - болезнь Кристмаса) - у 8 - 15% больных.
В процессе свертывания крови фактор IX не потребляется.
Определение фактора IX играет важнейшую роль в диагностике гемофилии В. С дефицитом фактора IX связывают большинство кровотечений при острых заболеваниях печени.
В зависимости от уровня фактора IX разделяют следующие клинические формы гемофилии В:
1. крайне тяжелая форма - концентрация фактора IX от 0 до 1%,
2. тяжелая форма - от 1 до 2%,
3. средней тяжести - от 2 до 5%,
4. легкая форма или субгемофилия - от 6 до 24%.
У больных легкой формой клинические проявления заболевания возникают после травм и хирургических вмешательств. Определенные трудности вызывает определение группы носителей гемофилии В. К этой группе могут быть отнесены женщины, у которых при повторных исследованиях выявлено содержание фактора IX ниже 40%, но выше 24%.
Минимальный гемостатический уровень активности фактора IX в крови для выполнения операций – 20 - 25%, при более низкой активности риск развития послеоперационных кровотечений чрезвычайно велик. Минимальный гемостатический уровень фактора IX в крови для остановки кровотечения – 10 - 15%, при более низком содержании остановка кровотечения без введения больному фактора IXневозможна.
Приобретенный дефицит фактора IX обнаруживается при заболеваниях печени, болезни Гоше, у больных с нефротическим синдром.
Фактор VIII (антигемофильный глобулин А)
Активность фактора VIII в плазме в норме – 60 - 145%.
Фактор VIIIсвертывания плазмы - антигемофильный глобулин А - циркулирует в крови в виде комплекса из трех субъединиц, обозначаемых:
VIII-к (коагулирующая единица),
VIII-АГ (основной антигенный маркер) и
VIII-фВ (фактор Виллебранда, связанный с VIII-АГ).
Считают, что VIII-фВ регулирует синтез коагуляционной части антигемофильного глобулина (VIII-к) и участвует в сосудисто-тромбоцитарном гемостазе. Фактор VIIIсинтезируется в печени, селезенке, клетках эндотелия, лейкоцитах, почках и принимает участие в первой фазе (протромбиназообразование) плазменного гемостаза.
Определение фактора VIIIиграет важнейшую роль в диагностике гемофилии А.
Развитие гемофилии А обусловлено врожденным недостатком фактора VIII. При этом в крови больных фактора VIIIнет (гемофилия А- ) или он находится в функционально неполноценной форме, которая не может принимать участия в свертывании крови (гемофилия А+ ). Гемофилия А- встречается у 90 - 92% больных, а гемофилия А+ - у 8 – 10. У больных гемофилией резко снижено содержание в плазме крови VIII-к, а концентрация в ней VIII-фВ находится в пределах нормы. Поэтому время длительности кровотечения при гемофилии А находится в нормативных пределах, а при болезни Виллебранда - удлинено.
Гемофилия А - наследственное заболевание, однако у 20 - 30% больных гемофилией семейный анамнез со стороны родственников матери никакой информации не дает. Поэтому определение активности фактора VIIIимеет большую диагностическую ценность.
В зависимости от уровня активности фактора VIIIразделяют следующие клинические формы гемофилии А:
· крайне тяжелая форма (активность фактора VIIIот 0 до 1%);
· тяжелая форма (активность фактора VIIIот 1 до 2%);
· средней тяжести (активность фактора VIIIот 2 до 5%);
· легкая форма, или субгемофилия (активность фактора VIIIот 6 до 24%).
Около трети носителей гемофилии А имеют уровень активности фактора VIIIмежду 25 и 49%. У больных легкой формой и носителей гемофилии А клинические проявления заболевания отмечаются только после травм и хирургических вмешательств.
Минимальный гемостатический уровень активности фактора VIII в крови для выполнения операций - 25%, при более низком содержании риск развития послеоперационных кровотечений чрезвычайно велик. Минимальный гемостатический уровень активности фактора VIIIв крови для остановки кровотечения – 15 - 20%, при более низком содержании остановка кровотечения без введения больному фактора VIIIневозможна. При болезни Виллебранда минимальный гемостатический уровень активности фактора VIIIдля остановки кровотечения и для выполнения операции - 25%.
При ДВС-синдроме, начиная со II стадии, отмечается отчетливое снижение активности фактора VIIIвследствие коагулопатии потребления. Тяжелые заболевания печени могут привести к снижению содержания фактора VIIIв крови. Содержание фактора VIIIснижается при болезни Виллебранда, а также при наличии специфических антител к фактору VIII.
Активность фактора VIIIзначительно повышается после спленэктомии.
В зависимости от уровня активности в плазме крови факторов ее свертывания выделяют клинические формы гемофилии А, В, С:
· крайне тяжелая форма - активность фактора VIII(IX и XI) от 0 до 1 %;
· тяжелая форма - активность фактора VIII (IXи XI) от 1 до 2%;
· средней тяжести - активность фактора VIII (IXи XI) от 2 до 5%;
· легкая форма, или субгемофилия, - активность фактора VIII(IX и XI) от 6 до 24%;
· минимальный гемостатический уровень — активности фактора VIII (IX) в крови для выполнения операций - 25%, для фактора XI – 5 - 15%.
В клинической практике очень важно отдифференцировать гемофилию от болезни Виллебранда.
Оценка второй фазы плазменного гемостаза — образования тромбина
Показатели, характеризующие вторую фазу:
1.Протромбиновое временя.
2.Активность V фактора.
3.Активность VII фактора.
4.Активность II фактора.
Протромбиновое время
Протромбинове время для взрослых в норме 11 - 15 с, для новорожденных – 13 - 18 с.
Протромбиновое время (ПВ) характеризует первую (протромбинообразование) и вторую (тромбинообразование) фазы плазменного гемостаза и отражает активность протромбинового комплекса (факторов VII, V, X и собственно протромбина - фактора П).
Увеличение протромби нового времени говорит о наклонности к гипокоагуляции и может зависеть от различных причин:
· недостаточность одного или нескольких факторов протромбинового комплекса при таких редких наследственных коагулопатиях, как гипопроконвертинемия (дефицит фактора VII) и гипопротромбинемия (дефицит фактора II);
· отмечаемое иногда при амилоидозе увеличение протромбинового времени, связанное с дефицитом фактора X, который поглощается амилоидом, а при нефротическом синдроме - с дефицитом факторов VII и V, которые выделяются с мочой;
· синтез факторов протромбинового комплекса в клетках печени, при заболеваниях которой количество их снижается, и протромбиновое время в определенной степени может служить показателем функционального состояния печени. Увеличение протромбинового времени отмечается при острых гепатитах, хронических гепатитах, циррозах печени, при подострой дистрофии печени и других поражениях паренхимы печени и является плохим прогностическим, признаком. При этом причиной увеличения протромбинового времени может стать и развивающееся в результате уменьшения поступления желчи в кишечник нарушение всасывания витамина К, который необходим для синтеза факторов протромбинового комплекса. Такова же причина увеличения протромбинового времени и при механической желтухе;
· энтеропатия и кишечные дисбактериозы, ведущие к недостаточности витамина К, также могут сопровождаться увеличением протромбинового времени;
· при лечении антагонистами витамина К - антикоагулянтами непрямого действия - нарушается конечный этап синтеза факторов протромбинового комплекса, и протромбиновое время удлиняется. Терапия непрямыми антикоагулянтам и считается адекватной, если протромбиновое время увеличивается в 2 раза;
· потребление факторов протромбинового комплекса при остром ДВС-синдроме ведет к раннему увеличению протромбинового времени (в 2 раза и более);
· при хроническом панкреатите, раке поджелудочной железы и желчного пузыря увели чение протромбинового времени может быть результатом поражения печени и(или) развития ДВС-синдрома;
· афибриногенемия, гипофибриногенемия (снижение содержания в крови фибриногена до 1 г/л и ниже), а также избыточное содержание гепарина в крови ведут к увеличению протромбинового времени;
· удлинение протромбинового времени выявляется при острых и хронических лейкозах вследствие развития ДВС-синдрома;
· повышение уровня антитромбина или антитромбопластина в крови также ведет к удлинению протромбинового времени;
· целая группа лекарственных препаратов способна удлинять протромбиновое время: ацетогексамид, анаболические стероиды, антибиотики, ацетилсалициловая кислота (в больших дозах), слабительные средства, метотрексат, никотиновая кислота, хинидин, хинин, тиазидные диуретики, толбутамид.
Укорочение протромбинового времени говорит о наклонности к гиперкоагуляции и может быть отмечено в начальных стадиях тромбоза глубоких вен нижних конечностей, при полицитемии, в последние месяцы беременности. Укорочение протромбинового времени вызывают следующие лекарственные препараты: ацетилсалициловая кислота (в небольших дозах), меркаптопурин, пероральные контрацептивы.
Определению протромбинового времени отводится ведущая роль в контроле за пероральной антикоагулянтной терапией. Однако при таком контроле протромбиновое время зависит от чувствительности используемого для этих целей тромбопластина. Разные тромбопластины различают по ISI (InternationalSensitivityIndex - Международный индекс чувствительности), который прилагается к описанию каждого набора. В 1983 г. ВОЗ совместно с Международным обществом тромбоза и гемостаза приняли тромбопластин из мозга человека за референтный и установили, что ISI этого тромбопластина равен 1,0 (Международный референтный препарат Всемирной организации здравоохранения). Все другие коммерческие тромбопластины калибруются по нему, и для каждого определяется своя чувствительность (ISI). Для сравнения результатов исследования протромбинового времени у больных, получающих пероральную антикоагулянтную терапию, необходимо рассчитать INR (InternationalNormalizedRatio), или международное нормализованное отношение (MHO).
INR - это попытка математически скорректировать разницу, даваемую тромбопластинами с различной чувствительностью, т.е. привести результат к данным, полученным с референтным тромбопластином.
Лабораториям рекомендуется работать с тромбопластином, имеющим ISI меньше 1,5. Кроличьи тромбопластины имеют ISI = 2,0 - 3,0.
Основная
8-09-2015, 23:03