СЕВЕРНЫЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

КУРС КЛИНИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ

Руководитель проф. Воробьёва Н.А.

Сбор и транспортировка проб биологических материалов для бактериологического исследования

Выполнила врач-ординатор Петрова Л. В.

Архангельск 2009 г.

Содержание

Ведение

1. Общие положения

2. Правила биологической безопасности

3. Оборудование и среды для взятия материала

4. Техника взятия основных видов биологического материала

4.1 Кровь

4.2 Ликвор

4.3 Отделяемое из верхних дыхательных путей

4.3.1 Мазок со слизистых передних отделов полости носа

4.3.2 Соскоб со слизистых передних отделов полости носа

4.3.3 Слизь из носоглотки и носа

4.3.4 Слизь с задней стенки глотки

4.3.5 Слизь с задней стенки глотки

4.3.6 Назальный смыв

4.3.7 Аспират из придаточных пазух

4.4 Отделяемое из нижних отделов дыхательных путей

4.4.1 Мокрота

4.4.2 Промывные воды бронхов

4.4.3 Пробы, полученные с использованием бронхоскопа

4.5 Желчь

4.6 Моча

4.7 Отделяемое из мочеполовых органов мужчин и женщин

4.7.1 Твердый шанкр, папулы, розеолы

4.7.2 Материал из уретры

4.8 Материал из половых органов у мужчин

4.8.1 Язва полового члена

4.8.2 Материал из простаты

4.8.3 Материал из яичка, егопридатков и паховых лимфатических узлов

4.9 Отделяемое женских половых органов

4.9.1 Материал из влагалища

4.9.2 Материал из цервикального канала

4.10 Раневые (хирургические) инфекции

4.11 Пробы при воспалительных заболеваниях глаз

4.11.1 Материал с конъюнктивы

4.11.2 Соскоб с роговицы

4.11.3 Смыв с контактных линз

4.12 Пробы при воспалительных заболеваниях органов слуха

4.12.1 Отделяемое из наружного слухового прохода

4.12.2 Жидкость при тимпаноцентезе

4.13 Инфекции в стоматологии

4.13.1 Содержимое из зубодесневого кармана

4.14 Пробы испражнений

4.14.1 Нативные испражнения

4.14.2 Ректальные мазки (Rectalswabs)

5. Особенности взятия материала и оформления направления на исследование при некоторых клинических ситуациях

5.1 Оформление направлений на исследование

5.2 Взятие материала для выявления стрептококков группы В

5.3 Взятие материала для диагностики дисбактериоза и заболеваний, вызываемых условно-патогеными бактериями

5.4 Взятие материала при подозрении на холеру по МУ 4.2.1097-02

5.5 Взятие рвотных масс и промывных вод

5.6 Взятие биоптата для исследования на хеликобактер

5.7 Взятие материала при подозрении на интранатальную инфекцию

5.8 Грудное молоко

5.9 Серодиагностика

5.10 Взятие крови из вены

5.11 Взятие крови с помощью вакуумной системы

5.12 Взятие крови с помощью шприца

5.13 Получение сыворотки из венозной крови

5.14 Взятие папиллярной крови для постановки микрореакции преципитации с целью диагностики сифилиса

Заключение

Список использованных источников

Ведение

В данном реферате я отразила правила сбора и транспортирования некоторых биологических материалов в микробиологические лаборатории. Приведённые способы помогут повысить качество результатов лабораторных исследований, что в свою очередь создаст условия для своевременной организации противоэпидемических и профилактических мероприятий, а также будет способствовать качественной профилактике внутрибольничных инфекций как у медицинского персонала, так и пациентов.

1. Общие положения

Взятие материала предпочтительно проводить до начала антибактериальной терапии. На фоне антибактериальной терапии материал забирают перед очередным введением антимикробных препаратов, то есть в момент, когда их концентрация в организме минимальна.

При взятии пробы следует строго соблюдать правила асептики, во избежание ее случайной посторонней контаминации.

Для взятия проб следует использовать стерильные инструменты, а для их транспортировки стерильные пробирки или контейнеры. Использование нестерильных сухих, чистых пробирок допускается только для отбора и транспортировки крови на серологические исследования.

Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования.

Транспортировка материала должна осуществляться в максимально короткие сроки: как правило, не более 1,5 — 2 часов.

Всегда следует стремиться использовать транспортные системы со средой (консерванты), что позволяет пролонгировать время транспортировки до 24 часов и более или осуществлять посев непосредственно у постели больного (кровь, ликвор и др.);

Материал для исследования на неспорообразующие анаэробы, доставляемый без использования транспортных систем со средой (консервантов) должен транспортироваться:

· в специальном герметично закрытом флаконе, заполненном инертным газом, в который проба вносится путем прокола крышки иглой шприца;

· в одноразовом шприце, из которого удален воздух, и кончик которого закрыт либо стерильной резиновой пробкой, либо иглой, с надетым на нее штатным защитным колпачком.

Все образцы должны иметь четкую маркировку, обеспечивающую их безошибочную идентификацию. К каждому образцу прикладывается направление. В направлении на исследование должны быть отображены следующие данные:

· дата и время назначения исследования;

· дата и время взятия биологического материала;

· Ф.И.О. пациента;

· отделение, номер амбулаторной карты/истории болезни, номер палаты;

· возраст, пол;

· диагноз;

· Ф.И.О. лечащего врача;

· перечень необходимых исследований;

· подпись специалиста, проводившего забор клинического материала.

2. Правила биологической безопасности

К работе по взятию и транспортировке биологического материала допускается медицинский персонал, прошедший специальный инструктаж по технике работы и мерам безопасности.

При взятии биологического материала должны использоваться средства защиты: медицинские халаты, шапочки, сменная обувь, резиновые (латексные, виниловые) перчатки, а при необходимости — дополнительно марлевые маски (респираторы), очки, клеенчатые фартуки.

Работать с исследуемым материалом следует в резиновых (латексных, виниловых) перчатках, все повреждения кожи на руках должны быть закрыты лейкопластырем или напальчником. Следует избегать уколов и порезов.

В случае загрязнения кожных покровов кровью или другими биологическими жидкостями следует немедленно обработать их в течение 2 мин. тампоном, обильно смоченным 70% спиртом, вымыть под проточной водой с мылом и вытереть индивидуальным тампоном. При загрязнении перчаток кровью их протирают тампоном, смоченным 3% раствором хлорамина, 6% раствором перекиси водорода.

При подозрении на попадание крови на слизистые оболочки, их немедленно обрабатывают струей воды, 1% раствором протаргола; рот и горло прополаскивают 70% спиртом или 1% раствором борной кислоты или 0,05% раствором перманганата калия.

Для транспортировки образцов следует использовать преимущественно пластиковую одноразовую тару, герметично закрытую пластмассовыми, резиновыми пробками или завинчивающимися крышками. Запрещается использовать стеклянную посуду со сколами, трещинами и т.п. При транспортировке сосудов, закрытых целлюлозными (ватными) пробками, следует исключить их увлажнение.

Транспортировка биоматериала осуществляется в специальных закрытых переносках (укладках), желательно - термостатированных, выдерживающих дезинфекцию.

Сопроводительная документация помещается в предназначенный для нее карман переноски (укладки), а в случае его отсутствия — кладется в переноску в отдельном полиэтиленовом пакете.

При хранении биологического материала в холодильнике каждый образец упаковывается в отдельный полиэтиленовый пакет. Для этой цели выделяется отдельный холодильник, хранение в котором пищевых продуктов и лекарственных препаратов не допустимо.

3. Оборудование и среды для взятия материала

Для взятия и транспортировки биологического материала следует использовать одноразовые стерильные тубсеры (пробирки с тампонами) промышленного производства или транспортные системы со средой. Ватные (хлопковые) тампоны, изготовляемые непосредственно в лаборатории из медицинской ваты могут быть использованы только в крайнем случае, так как медицинская вата может обладать антимикробными свойствами.

Для снятия возможного бактерицидного действия тампоны из медицинской ваты после изготовления кипятят в буферном растворе Соренсена (18 мл 1/15М раствора КН2Р04 + 8,2 мл 1/15 М раствора NaHP04; pH 7,4), встряхивают, высушивают в термостате, помещают в пробирки и стерилизуют в автоклаве при 120°С 30 минут.

Если тампоны предназначены для взятия материала на гонорею их 20 минут кипятят в фосфатном буфере (181,7 мл 0,2М NaH,P04 + 18,3 мл 0,1 М раствора лимонной кислоты; рН 7,4) и импрегнируют в течение 24 часов в 1 % водной суспензией тонко измельченного древесного угля. Затем тампоны высушивают, подправляют, монтируют в пробки и стерилизуют в автоклаве при 120°С 20 минут.

Для транспортировки материала целесообразно использовать специальные транспортные системы со средой. Их выбор с учетом вида материала, цели исследования и технических возможностей осуществляет лаборатория. К. числу наиболее универсальных транспортных сред относятся среда Стюарта и среда Эймс.

Транспортная система со средой Стюарта Среда Стюарта представляет собой полужидкий, бедный питательными веществами субстрат для сохранения и транспортировки широкого спектра патогенных микроорганизмов, таких, как Neisseriagonorrhoeae, Haemophilusinfluenzae, Corynebacteriumdiphteriae, Trichomonasvaginalis, Streptococcussp., Salmonellasp., Shigellasp. и др. Наиболее требовательные микроорганизмы сохраняются в данной среде более суток, прочие -до нескольких дней.

Наличие в среде тиогликолата подавляет ферментативную активность бактерий, а отсутствие азота предотвращает их размножение.

Транспортная система со средой Кери Блейр

Представляет собой модификацию базовой транспортной среды Стюарта, предназначенную специально для фекальных образцов. Глицерофосфат, являющийся метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichiacoli, Klebsiellapneumoniae, и др.), заменен неорганическим фосфатом, удален метиленовый синий, и рН среды поднята до 8,4.

Среда Кери Блейр позволяет сохранять большинство патогенов, включая требовательные микроорганизмы, такие, как Neisseriasp., Haemophilussp., Streptococcussp. Данная среда является стандартной для транспортировки анаэробов.

Транспортная система со средойЭймса

Представляет собой очередную модификацию базовой транспортной среды Стюарта, в которой глицерофосфат заменен неорганическим фосфатом, поскольку глицерофосфат является метаболитом некоторых энтеробактерий (Escherichiacoli, Klebsiellapneumoniae, ets.) и может поддерживать рост некоторых грамотрицательных микроорганизмов.

Метиленовый синий заменен на активированный уголь фармацевтического качества. В среду добавлены кальций и магний для поддержания проницаемости бактериальных клеток.

Эта среда способна более 3 дней поддерживать такие микроорганизмы, как Neisseriasp., Haemophilussp., Corynebacteria, Streptococci, Enterobacteriaceae и др., однако наилучшие результаты дает культивирование в течение первых 24 часов.2 часов. При использовании транспортной системы со средой срок доставки пробы в лабораторию может быть продлен максимально до 72 часов.

4. Техника взятия основных видов биологического материала

4.1 Кровь

Показания к проведению исследования: клиническая картина сепсиса; лихорадочные состояния неустановленной этиологии; пневмонии; подозрение на инфекционные заболевания: брюшной тиф и паратифы, сальмонеллезы, бруцеллез, возвратный тиф, лептоспирозы, малярия, эпидемический менингит, пневмококковые инфекции, пищевые токсикоинфекции (при наличии лихорадки), стафилококковые и стрептококковые инфекции, сибирская язва, туляремия, чума.

Количество независимо отбираемых проб крови и время их взятия определяется лечащим врачом (табл. 1). Как правило, должны исследоваться не менее 2—3 проб крови, каждая из которых взята путем отдельной венепункции. Это необходимо для дифференциации истинной бактериемии от случайной контаминации крови при венепункции. Вероятность загрязнения вследствие случайного прокола сальной или потовой железы составляет 3%.

Таблица 1. Рекомендуемое число отбираемых проб крови в зависимости от клинической ситуации

У больных, получающих антибактериальные препараты, пробы необходимо собирать непосредственно перед введением следующей дозы препарата. При наличии лихорадки оптимальным является взятие крови на фоне повышения температуры тела (но не на пике температуры!).

Необходимое оснащение.

1. Шприцы одноразовые 20-граммовые (для детей 10-граммовые) с иглами для венепункции. Запрещается использовать шприцы со «стерильного стола» в перевязочной, проверять проходимость иглы, просасывая через нее воздух.

2. Флаконы с питательными средами: среда для аэробов и факультативных анаэробов + среда для облигатных анаэробов (например, двойная среда + среда СКС) или универсальная среда для аэробов и анаэробов. Предпочтительно использовать промышленно произведенные среды, разрешенные к применению. При использовании изготовленной в лаборатории среды СКС в качестве индикатора анаэробиоза в нее добавляют резазурин, который краснеет в присутствии кислорода. В случае покраснения более 20% верхней части столбика среду регенерируют прогреванием в течение 20 минут в кипящей водяной бане. Регенерацию можно провести лишь однократно. При отсутствии резазурина среду регенерируют перед посевом в обязательном порядке. Оптимальным средством отбора пробы венозной крови являются вакуумные двухфазные флаконы к аппарату Бактек (Bactec).

3. 70° этиловый спирт.

4. 2% или 5% настойка йода.

5. Венозный жгут.

6. Резиновые (латексные, виниловые) перчатки.

7. Спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории).

Взятие исследуемого материала.

Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики. Кровь берут у постели больного или в перевязочной (процедурной) и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного, венепункцию и взятие крови, второй, в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает горлышки флаконов и закрывает их.

Кровь для исследования получают путем венепункции.

Порядок обработки кожи и взятия крови следующий:

1. кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70° спиртом;

2. наносят 2-5% йодную настойку, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.;

3. после высыхания йодной настойки проводят венепункцию;

4. пальпировать сосуд в районе введения иглы после обработки кожи нельзя;

5. протирают кожу 70° спиртом.

У взрослых кровь берут в объеме 10-20 мл, у детей — в зависимости от возраста.

Сразу после взятия кровь засевают на питательные среды. Соотношение крови и среды должно быть 1/10—1/60 для устранения бактерицидного действия крови путем ее разведения. Техника посева зависит от вида используемых питательных сред.

При использовании сред лабораторного приготовления, расфасованных во флаконы с целлюлозными (ватными) пробками, посев проводят следующим образом:

· снимают иглу со шприца;

· над пламенем спиртовки открывают флакон;

· вносят половину крови из шприца во флакон;

· обжигают горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки;

· закрывают флакон пробкой;

· осторожно, чтобы не замочить пробку, перемешивают содержимое флакона круговыми движениями;

· вторую порцию крови из шприца вносят во второй флакон, повторяя указанные операции.

При использовании флаконов со средами промышленного изготовления во флаконах с резиновыми либо пластиковыми пробками:

· при наличии на флаконах защитных колпачков их удаляют (отгибают), не открывая при этом пробки;

· пробки флаконов обрабатывают 70% этиловым спиртом (использование йодной настойки определяется рекомендациями производителя сред);

· кровь в равных объемах вносят в «аэробную» и «анаэробную» питательные среды, проколов при этом пробки флаконов. Если предполагается проведение бактериоскопического исследования, дополнительно готовят препарат «толстая капля» и мазок.

Для приготовления мазка каплю крови диаметром 2—3 мм наносят на обезжиренное предметное стекло вблизи от торца. Перед каплей крови ставят под углом 45° одноразовый пластиковый шпатель для растяжки мазков или стекло со шлифованным краем и плавным движением равномерно распределяют материал по поверхности.

Для приготовления препарата «толстая капля» на стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм и распределяют ее с помощью иглы или пипетки в диск диаметром 10—15 мм. Толщина капли должна позволять видеть через нее газетный шрифт. Иногда мазок и препарат «толстая» капля готовят на одном стекле. Для этого на поверхность приготовленного как описано выше мазка до его высыхания наносят еще одну каплю крови. Она, как правило, сама растекается в правильный диск необходимой толщины.

Препараты высушивают («толстая капля» сохнет 2—3 часа) и доставляют в лабораторию в специальном планшете для хранения и транспортировки стекол с соблюдением необходимой осторожности. Посевы крови немедленно доставляют в лабораторию, оберегая от охлаждения.

Бактериологическая лаборатория при исследовании посевов крови выдает отрицательный ответ в случае, если рост микроорганизмов не обнаружен в течение 10 дней инкубации. В случае наличия у больного подозрения на внутрисосудистую инфекцию или бруцеллез возникает необходимость пролонгированной (до 1 месяца) инкубации посевов. Это должно быть особо отмечено в направлении. Рутинный посев крови не обеспечивает выявления ряда микроорганизмов.

4.2 Ликвор

Показания к проведению исследования: подозрение на нейроинфекцию. При подозрении на гнойный менингит в обязательном порядке в лабораторию направляют:

1. Ликвор для первичного посева, бактериоскопии и серологических исследований в количестве не менее 1,0 мл.

2. Ликвор в 0,1% полужидком агаре (среда «обогащения»).

3. «Толстая капля» крови для бактериоскопии.

4. Кровь в жидкой питательной среде или в 0,1% полужидком агаре (среда обогащения) для бактериологического накопления культуры: 5,0 мл крови засевают в 50,0 мл среды обогащения.

5. Кровь в количестве не менее 2-х мл для серологических исследований (РПГА, ВИЭФ, ЛА и др.).

Необходимое оснащение:

1. Игла для люмбальной пункции.

2. Мандрены.

3. Анестетик.

4. 70° этиловый спирт.

5. 2% или 5% настойка йода или другой антисептик, разрешенный к применению.

6. Перевязочный материал.

7. Стерильные пластиковые пробирки, лучше центрифужные с завинчивающимися крышками.

8. Шоколадный агар (желательно).

9. 0,1% полужидкий агар.

Взятие исследуемого материала:

Ликвор получают путем люмбальной пункции. Желательно взять материал сразу при поступлении больного в стационар, до начала лечения.

Пункция и взятие материала проводятся с соблюдением всех правил асептики, персонал работает в масках.

•Больной укладывается в положение на боку, головной конец кровати максимально опущен, голова прижата к груди, ноги — к животу, спина максимально согнута.

Определяются необходимые для выбора места пункции анатомические ориентиры. Пункцию проводят между поясничными позвонками L3-L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1.

Обрабатывают область пункции сначала раствором антисептика, а затем 70° спиртом.

•Пальпируют рукой в стерильных перчатках точку пункции и вводят раствор анестетика.

Проводят пункцию иглой со вставленным мандреном до ощущения «провала».

Извлекают мандрен.

•Первую порцию ликвора берут в отдельную пробирку для проведения общего ликворологического исследования. Вторую порцию, предназначенную для бактериологического исследования, собирают в стерильную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой.

Согласно МУК 4.2.1887—04 ликвор после пункции распределяют следующим образом:

· 1,0 мл направляют в клиническую лабораторию для проведения общего ликворологического и цитологического исследования;

· 0,2 мл направляют для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР);

· 1,0 мл направляют для первичного бактериологического посева (если не сделан в отделении при пункции), бактериоскопии и серологических исследований; для бактериологического и бактериоскопического исследований отбирается либо вторая порция ликвора, либо самая мутная из всех. Ее отбирают в стерильную, желательно центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой;

· 0,5 мл засевают в чашку с «шоколадным» агаром непосредственно у постели больного. Далее чашку хранят в условиях термостата при 37°С до доставки в лабораторию;

· 0,5 мл засевают в 5,0 мл 0,1% полужидкого питательного агара непосредственно у постели больного и далее хранят при +37°С в условиях термостата до доставки в лабораторию;

Касаться руками краев канюли, иглы, пробирки, класть пробку — нельзя.

Доставлять материал в бактериологическую лабораторию лучше в термостатированной переноске


9-09-2015, 00:25