3. В каждую лунку или пробирку с приготовленным 40-кратным разведением тестируемых и контрольных сывороток добавляют гранулы, покрытые сывороткой кролика против ц-цепей IgM человека. Образцы инкубируют 3 ч при 37 °С.
4. Гранулы трижды промывают PBST, а затем инкубируют с 200 мкл ГА-антигена вируса краснухи, разведенного в 10 раз в PBST. Образцы инкубируют 18—24 ч при 4°С. После инкубации гранулы трижды промывают в PBST.
5. В каждый образец добавляют по 200 мкл антител-детекторов, меченных 125 1 и разведенных до 50 000 имп/мин на 200 мкл. Для разведения используют PBS с 2% твин 20, 20% кроличьей сыворотки и 10% заведомо отрицательной человеческой сыворотки.
6. Гранулы промывают четыре раза PBST и определяют радиоактивность с помощью счетчика. Далее усредняют результаты параллелей, вычитают счет фона и строят калибровочную кривую. Данные по контрольным сывороткам наносят на логарифмическую бумагу. Количество относительных единиц в исследуемых сыворотках определяют, сравнивая построенную калибровочную кривую со стандартной калибровочной кривой.
5.4.3 Интерпретация полученных результатов
Сыворотка, содержащая 3,3 условной единицы и более 3,3, считается положительной. Данный результат свидетельствует о недавно перенесенной или врожденной инфекции. Сыворотка, содержащая менее 1 условной единицы, считается отрицательной. Сыворотка, содержащая от 1 до 3,3 условной единицы, не может считаться ни положительной, ни отрицательной. В этом случае диагноз ставится с учетом клинической картины заболевания. Как правило, такие сыворотки все же рассматриваются как отрицательные. Тем не менее, они могут свидетельствовать об инфекции, перенесенной ранее.
8-09-2015, 19:41