Вплив збудників захворювань вірусної етіології на реплікативну активність віл у хворих на віл-інфекцію

Таблиця 1

Частота виявлення серологічних маркерів інфікування ВПГ1/2, ЦМВ та ВЕБ у ВІЛ-інфікованих осіб (в залежності від шляху інфікування ВІЛ)

інфікованих ВІЛ парентеральним шляхом, більшість з яких є споживачами ін’єкційних наркотиків. Відповідно до результатів даної роботи, ця гіпотеза не підтвердилася: антитіла класу IgM з однаковою частотою виявлялися у осіб зі статевим та парентеральним шляхами інфікування ВІЛ.

Поширення гепатитів В і С у хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД. Поряд з інфекціями герпесвірусної природи, у ВІЛ-позитивних осіб з високою частотою виявлялись серологічні маркери гепатитів В і С, особливо мікст-гепатитів В+С. Так, у осіб в І клінічній стадії ВІЛ-інфекції (І група) частота виявлення серологічних маркерів моно-ВГС-інфекції становила 13,33±3,92%, моно-ВГВ-інфекції – 8,0±3,13%, мікст-інфекції ВГС+ВГВ – 53,33±5,76%. У осіб в ІІІ клінічній стадії ВІЛ-інфекції (ІІ група) ці показники становили 28,0±6,35%,8,0±3,84% та 48,0±7,1% відповідно. Тобто, 74,66% осіб з першої групи та 84,0% осіб з другої групи мали серологічні маркери інфекцій, спричинених ВГС та/або ВГВ.

Частота виявлення маркерів моно-ВГС-інфекції у осіб в ІІІ-ІV стадії ВІЛ-інфекції, які отримували ВААРТ (ІІІ група), становила 24,0±2,47%, моно-ВГВ-інфекції – 11,33±1,83%, в той час як частка осіб, які мали серологічні маркери мікст-гепатитів В+С, складала 40,67±2,84%. Загальна кількість осіб, які мали антитіла до ВГС, серед ВІЛ-інфікованих пацієнтів, включених в ІІІ дослідну групу, становила 64,67±2,76%, частка осіб, які мали серологічні маркери ВГВ-інфекції, – 52,0±2,88%; в цілому 76% пацієнтів з цієї групи мали серологічні маркери гепатиту С та/або гепатиту В. Очевидно, інфікування вірусами гепатитів В і С відбувається до зараження ВІЛ, тому у осіб на різних клінічних стадіях ВІЛ-інфекції частота виявлення серологічних маркерів гепатитів В і С була майже однаковою.

Аналіз рівня розповсюдження серологічних маркерів гепатитів В і С серед ВІЛ-інфікованих осіб в залежності від шляху інфікування ВІЛ, дозволив встановити, що маркери гепатиту С та мікст-гепатиту В+С достовірно частіше виявлялися у споживачів ін’єкційних наркотиків, інфікованих ВІЛ парентеральним шляхом. Так, частота виявлення серологічних маркерів моно-ВГС-інфекції у осіб, інфікованих ВІЛ статевим шляхом, становила 11,88±2,56%, мікст-інфекції ВГС+ВГВ – 8,13±2,16%, в той час, як у осіб, інфікованих ВІЛ парентеральним шляхом, ці показники становили 29,06±2,79% та 65,28±2,92% відповідно. Різниця між цими показниками була статистично достовірною (р<0,05).

Варто зауважити, що серологічні маркери моно-ВГВ-інфекції, навпаки, частіше виявлялися у осіб, інфікованих ВІЛ статевим шляхом (23,13± 3,33% та 2,64± 0,98% відповідно) (р<0,05). Це, імовірно, пов’язано з тим, що на відміну від вірусу гепатиту С, ВГВ ефективно передається статевим шляхом, оскільки цей збудник у досить високих концентраціях присутній в усіх біологічних рідинах – в крові, слині, спермі та ін.

Привертав увагу той факт, що у більшості ВІЛ-інфікованих осіб єдиним серологічним маркером ВГВ-інфекції були анти-НВс, так звані ізольовані антитіла. Інший серологічний маркер ВГВ-інфекції – HBsAg – в сироватці крові ВІЛ-інфікованих осіб виявлявся значно рідше. Загалом, він був присутній в 6,59±1,20% зразків сироватки крові (у 28 із 425 пацієнтів, включених у дослідження). В деяких дослідженнях показано, що присутність ізольованих антитіл до НВс-антигена ВГВ є ознакою латентної ВГВ-інфекції, яка характерна для ВІЛ/ВГВ-коінфікованих осіб та для осіб, хворих на мікст-гепатит В+С (Гураль, 2006).

При визначенні спектру антитіл класу IgG до різних антигенів вірусу гепатиту С, а саме до структурного (core) та неструктурних (NS3, NS4, NS5) білків, було виявлено, що у більшості серопозитивних пацієнтів в крові циркулює повний спектр антитіл класу IgG до антигенів ВГС, що часто корелює з активною реплікацією вірусу у інфікованих осіб. Частка осіб, у яких було виявлено антитіла до всіх антигенів ВГС, становила 61,58±3,53%.

На наступному етапі роботи було проведено дослідження частоти виявлення маркерів активної реплікації збудників гепатитів В та С у ВІЛ-інфікованих осіб, які мали серологічні маркери ВГС- та ВГВ-інфекції.

На основі аналізу даних щодо частоти виявлення ДНК ВГВ у ВІЛ-інфікованих осіб було встановлено, що при коінфекціях ВІЛ/ВГВ та ВІЛ/ВГС/ВГВ активна реплікація ВГВ реєструється дуже рідко – у осіб в І та ІІІ клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які не приймали антиретровірусних препаратів, ДНК ВГВ виявлялася в поодиноких випадках, а у ВІЛ-інфікованих осіб в ІІІ-ІV стадії ВІЛ-інфекції, які приймають ВААРТ, вона взагалі не виявлялася. У пацієнтів, які не приймали АРВ-препаратів, це, очевидно, було пов’язано з наявністю коінфекцій ВІЛ та/або ВГС: серед ВІЛ-інфікованих осіб часто зустрічається латентна форма гепатиту В, при якій ДНК ВГВ в плазмі крові може не виявлятися, а взаємодія між ВГС та ВГВ при коінфекції розвивається, як правило, за типом інтерференції. В групі осіб, які отримували ВААРТ, відсутність активної реплікації ВГВ скоріше за все можна пояснити дією нуклеозидного інгібітора зворотної транскриптази ламівудину, який входить в схему ВААРТ більшості пацієнтів, включених в дослідження.

Необхідно підкреслити той факт, що у більшості ВІЛ-інфікованих споживачів ін’єкційних наркотиків було виявлено серологічні маркери мікст-гепатитів В+С. Незважаючи на те, що майже у всіх пацієнтів ВГВ перебував в латентній формі без ознак активної реплікації, згідно з даними літератури, у пацієнтів з мікст-гепатитами ступінь пошкодження печінки, ризик розвитку фіброзу та цирозу печінки набагато вищий, ніж у пацієнтів з моно-гепатитами.

Було встановлено, що на відміну від вірусу гепатиту В, активна реплікація ВГС виявлялася у більшості ВГС-серопозитивних осіб. Так, РНК ВГС була виявлена в 80,0±7,30% зразків плазми крові осіб І дослідної групи, які мали антитіла до ВГС, в 83,33±6,80% зразків плазми крові пацієнтів ІІ дослідної групи та 88,0±3,75% зразків плазми крові, отриманих від ВІЛ-інфікованих осіб, які знаходились в ІІІ-ІV стадії ВІЛ-інфекції та отримували АРВ-терапію (ІІІ група). При цьому, частота виявлення РНК ВГС не залежала від наявності серологічних маркерів інфекції ВГВ, хоча в деяких роботах було показано, що при мікст-інфекції ВГС+ВГВ обидва віруси можуть пригнічувати реплікацію один одного (Liu, 2006).

Вивчення субтипової структури популяції ВГС виявило домінування у ВІЛ-інфікованих осіб субтипів 1в та 3а ВГС. Були відмічені відмінності в субтиповій структурі популяції ВГС в залежності віл шляху інфікування ВІЛ: поряд з вищевказаними субтипами ВГС в у осіб, інфікованих ВІЛ статевим шляхом, достовірно частіше виявлявся субтип 1а ВГС, порівняно з пацієнтами, інфікованими ВІЛ парентеральним шляхом (28,0±8,97% та 8,89±2,95% відповідно). Значне поширення ВГС з субтипом 1в у ВІЛ-інфікованих осіб вказує на те, що терапія вірусного гепатиту С у них може бути ускладнена, у зв’язку із стійкістю вірусу з таким субтипом до препаратів інтерферону, які є основним класом препаратів, що використовуються для лікування цього захворювання.

Дослідження рівня реплікативної активності ВГС у ВІЛ/ВГС-коінфікованих пацієнтів, проведене на наступному етапі даної роботи, дало змогу встановити, що середній показник рівня вірусного навантаження ВГС у плазмі крові ВІЛ/ВГС-коінфікованих осіб, які отримували ВААРТ, був достовірно вищим, порівняно з відповідним середнім показником у пацієнтів, які не отримували такої терапії (р<0,05). Так, середній показник вмісту РНК ВГС в зразках плазми ВІЛ/ВГС-коінфікованих осіб, які не приймали антиретровірусних препаратів, становив 7,76х10⁵ ±3,1х10⁵ копій РНК ВГС/мл плазми. У пацієнтів, які отримують високоактивну антиретровірусну терапію, рівень вірусного навантаження ВГС становив 36,0х10⁵ ±2,2х10⁵ РНК-копій/мл плазми. Можна припустити, що високий рівень вірусного навантаження ВГС у пацієнтів, які отримують ВААРТ, пов'язаний з відновленням функцій імунної системи під впливом ВААРТ, що, в свою чергу, призводить до зростання мінливості ВГС, накопичення великої кількості квазівидів вірусу та, як наслідок, зростання його кількості в крові (Babik J.M., 2003).

Окрім зв’язку між показниками вірусного навантаження ВГС та прийомом ВААРТ, було встановлено зв’язок між генотиповою приналежністю ВГС та рівнем РНК ВГС в плазмі крові ВІЛ-позитивних осіб, які не отримують такої терапії. Так, у пацієнтів, які були інфіковані ВГС, що належить до субтипу 1в, середній показник концентрації РНК ВГС в плазмі був в 15 разів вище, ніж відповідний показник у осіб, у яких гепатит був спричинений ВГС інших субтипів (р<0,05). У пацієнтів в ІІІ-ІV клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які отримують ВААРТ, такої закономірності встановлено не було: у цих пацієнтів показники вірусного навантаження ВГС були високими незалежно від генотипу ВГС.

Вплив збудників захворювань вірусної етіології на реплікативну активність ВІЛ та імунний статус хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД. Аналіз частоти виявлення серологічних маркерів активації герпесвірусних інфекцій в залежності від рівня вмісту СD4 лімфоцитів у ВІЛ-інфікованих осіб дав можливість встановити, що активація наведених інфекцій частіше реєструвалася у осіб із значним рівнем імуносупресії: найвищі показники частоти виявлення антитіл класу IgM до герпесвірусів були зареєстровані у осіб, кількість CD4 лімфоцитів у яких не перевищувала 300кл/мкл крові.

Було виявлено, що у пацієнтів в ІІІ клінічній стадії ВІЛ-інфекції, у яких рівень вмісту CD4 лімфоцитів не перевищував 300 кл/мкл крові, і які не отримували антиретровірусних препаратів, при активації збудників герпесвірусних інфекцій реєструвалися достовірно вищі показники рівня вірусного навантаження ВІЛ-1, порівняно з групою осіб, у яких не було виявлено антитіл класу ІgМ до герпесвірусів (середні показники вірусного навантаження становили 24,3х10⁴ ±2,96х10⁴ РНК-копій ВІЛ-1/мл плазми крові та 8,59х10⁴ ±2,80х10⁴ РНК-копій ВІЛ-1/мл плазми крові відповідно, р<0,05). За умови отримання ВААРТ, у більшості осіб, які мали серологічні маркери активації герпесвірусів, рівень вірусного навантаження ВІЛ-1 не перевищував 75 РНК-копій/мл плазми, однак при цьому середній рівень кількості CD4 лімфоцитів у них був нижче, порівняно з пацієнтами, які мали відповідну стадію ВІЛ-інфекції, але у яких не було виявлено маркерів активації збудників герпесвірусних інфекцій.

Тобто, при зменшенні числа CD4 лімфоцитів відбувається активація герпесвірусів, що, в свою чергу, може призводити до поглиблення імуносупресії та стимуляції репродукції ВІЛ, оскільки у пацієнтів в ІІІ клінічній стадії ВІЛ-інфекції, які мали антитіла класу IgM до герпесвірусів, рівень вірусного навантаження ВІЛ-1 був достовірно вище, ніж у пацієнтів, у яких не було виявлено серологічних маркерів активації герпесвірусних інфекцій. Серед можливих механізмів такого впливу – здатність герпесвірусів стимулювати синтез ряду цитокінів, які призводять до активації CD4 лімфоцитів, а це, як відомо, є необхідною умовою інтеграції про-ДНК ВІЛ в геном інфікованої клітини та активації вірусної реплікації (Griffiths P.D., 1998).

Аналіз рівня вірусного навантаження ВІЛ-1 у ВІЛ-інфікованих осіб в залежності від наявності маркерів активної реплікації ВГС показав, що у пацієнтів в І та ІІІ клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які не отримували ВААРТ (І та ІІ групи дослідження), середнє значення рівня вмісту РНК ВІЛ-1 при наявності РНК ВГС в плазмі крові статистично не відрізнялося від середніх показників вірусного навантаження ВІЛ-1 у осіб, у яких не було виявлено реплікативно-активних форм ВГС та маркерів активації герпесвірусних інфекцій. Однак, привертав увагу той факт, що при більш високих показниках вірусного навантаження ВІЛ реєструвалися вищі значення рівня вмісту РНК ВГС в плазмі крові коінфікованих осіб, що дало можливість припустити існування кореляційного зв’язку між наведеними величинами. Це підтверджувалося тим фактом, що у пацієнтів, які отримували ВААРТ, при наявності РНК ВГС в плазмі крові частіше реєструвалися показники рівня вірусного навантаження ВІЛ вищі, ніж 1000 РНК-копій/мл плазми, які свідчили про неефективність відповідних схем ВААРТ для цих пацієнтів. Зважаючи на високий рівень вірусного навантаження ВГС у пацієнтів в ІІІ-ІV клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які отримують ВААРТ, можна припустити, що реплікація ВГС призводить до активації реплікації ВІЛ-1 у таких пацієнтів.

З метою кількісної оцінки зв’язку між показниками вірусного навантаження ВІЛ-1 та ВГС було проведено кореляційний аналіз і визначено коефіцієнт кореляції між відповідними показниками. Виявлено, що у осіб в різних клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які не отримували ВААРТ, між показниками рівня вірусного навантаження ВІЛ та ВГС був достовірний сильний позитивний зв'язок: тобто, зростання показників рівня вмісту РНК ВГС пов’язане із зростанням показників рівня вмісту РНК ВІЛ-1, і навпаки (r=0,8; m=0,15; р<0,05) (рис.2). На противагу цьому, у пацієнтів в ІІІ-ІV клінічній стадії ВІЛ-інфекції, які отримують ВААРТ, статистично достовірного лінійного зв’язку між показниками рівня вірусного навантаження ВІЛ та ВГС в плазмі коінфікованих осіб виявлено не було.

Було проаналізовано частоту виявлення РНК ВГС у ВІЛ-інфікованих пацієнтів, які мали серологічні маркери гепатиту С, в залежності від кількості CD4 лімфоцитів. Виявилося, що у пацієнтів з більш низьким рівнем вмісту CD4 лімфоцитів частота виявлення маркерів активної реплікації ВГС була вищою. При цьому у пацієнтів в І та ІІІ клінічних стадіях ВІЛ-інфекції, які не отримували ВААРТ, при більш високих значеннях вірусного навантаження ВГС реєструвалися нижчі показники вмісту CD4 лімфоцитів, що могло вказувати на наявність кореляційного зв’язку між цими показниками.

З метою дослідження кількісного зв’язку між значеннями рівня вірусного навантаження ВГС та показниками вмісту CD4 лімфоцитів у ВІЛ-інфікованихпацієнтів в ІІІ-ІV клінічній стадії

ВІЛ-інфекції, які отримують ВААРТ, і у ВІЛ-позитивних осіб в І та ІІІ клінічних стадіях хвороби, які не приймають АРВ-препаратів, було проведено кореляційний аналіз цих показників, обчислено коефіцієнт кореляції.

Встановлено, що у пацієнтів, які не отримують ВААРТ, між показниками рівня вірусного навантаження ВГС та показниками вмісту CD4 лімфоцитів існує достовірний лінійний зворотний зв'язок (r = – 0,7; m=0,18; р<0,05) (рис.3): тобто, зростання показників рівня вірусного навантаження ВГС пов’язано із зниженням кількості CD4 лімфоцитів, і навпаки.

Механізми цього явища потребують подальшого дослідження, однак, найбільш імовірним поясненням такого зв’язку є втрата контролю над реплікацією ВГС з боку імунної системи у осіб з низькими показниками вмісту CD4 лімфоцитів. Крім того, це може бути пов’язано із здатністю ВГС викликати апоптоз Т-лімфоцитів, тобто з прямим цитотоксичним впливом ВГС на лімфоцити.

У пацієнтів в ІІІ-ІV клінічній стадії ВІЛ-інфекції, які отримують ВААРТ, не було виявлено достовірного лінійного зв’язку між показниками вірусного навантаження ВГС та рівнем вмісту CD4 лімфоцитів в плазмі крові. Очевидно, при прийомі АРВ-препаратів, внаслідок різкого зниження рівня вірусного навантаження ВІЛ-1 і поступового зростання кількості CD4 лімфоцитів з одного боку, та стимуляцією реплікації ВГС з іншого боку, зв'язок між рівнем вмісту РНК ВГС та цими показниками у коінфікованих осіб втрачається.

Наявність позитивного кореляційного зв’язку між рівнем вірусного навантаження ВІЛ і ВГС, та наявність зворотного кореляційного зв’язку між показниками рівня вмісту РНК ВГС та кількості CD4 лімфоцитів в плазмі крові коінфікованих пацієнтів, які не отримують ВААРТ, свідчить, на нашу думку, про те, що вірус гепатиту С також має здатність впливати на активність реплікації ВІЛ, можливо, шляхом активації CD4 лімфоцитів, та поглиблювати рівень імунодефіциту у таких пацієнтів. Прийом АРВ-препаратів призводить до послаблення зв’язку між цими величинами, однак, при цьому активна реплікація ВГС може впливати на ефективність ВААРТ, оскільки у коінфікованих осіб частіше реєструвався високий рівень вірусного навантаження ВІЛ-1.

Отже, виявлено, що збудники коінфекцій вірусного ґенезу можуть призводити до активації реплікації ВІЛ у хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД, особливо у тих, які мають виражений імунодефіцит та не отримують ВААРТ.

Тобто, взаємодія між різними вірусами в умовах коінфекції може призводити до взаємного посилення їх репродукції, або до пригнічення одного вірусу при активації реплікації іншого. Вірусні коінфекції є серйозною медико-біологічною проблемою, оскільки їх взаємний вплив, з одного боку, не дозволяє прогнозувати перебіг захворювань, спричинених цими вірусами, а з іншого боку, не дає можливості передбачити наслідки дії антивірусних препаратів.

Результати даної роботи дозволили прийти до узагальнення про важливість систематичного обстеження ВІЛ-інфікованих осіб на наявність маркерів вірусного гепатиту С і необхідність контролю рівня реплікативної активності ВГС при виявленні ознак неефективності антиретровірусної терапії, оскільки цей вірус може сприяти активації реплікації ВІЛ.

Таким чином, на підставі проведених досліджень було досягнуто кінцевої мети – вивчено зв'язок між активацією збудників захворювань вірусного ґенезу, рівнем реплікативної активності ВІЛ та показниками імуносупресії у осіб, хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД.

ВИСНОВКИ

Дано теоретичне узагальнення та вирішення актуальної задачі вірусології щодо встановлення зв'язку між активністю збудників захворювань вірусної етіології (герпесвірусних інфекцій, гепатитів В і С) та рівнем реплікативної активності ВІЛ у хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД.

Вперше в Україні вивчено частоту активації збудників вірусних коінфекцій у хворих на ВІЛ-інфекцію/СНІД в залежності від стадії ВІЛ-інфекції, шляху інфікування ВІЛ та прийому АРВ-препаратів.

Показано широке розповсюдження коінфекцій вірусної етіології серед хворих на ВІЛ-інфекцію: серологічні маркери гепатиту С виявлено у 66,35±2,29% осіб, гепатиту В – 54,12±2,42% осіб, мікст-інфекції ВГВ+ВГС – у 43,76±2,41% ВІЛ-інфікованих осіб.

У осіб, інфікованих ВІЛ парентерально, частота виявлення серологічних маркерів гепатиту С та мікст-гепатитів В+С була достовірно вищою (29,06±2,79% та 65,28±2,92% відповідно), ніж у пацієнтів, інфікованих ВІЛ статевим шляхом (11,88±2,56% та 8,13±2,16% відповідно). Серологічні маркери гепатиту В, як моноінфекції, частіше виявлялися у осіб, інфікованих ВІЛ статевим шляхом (23,13±3,33%), ніж парентеральним (2,64±0,98%).

Встановлено, що у ВІЛ/ВГС-коінфікованих осіб з високою частотою (85,19±3,06%) виявлялася активна реплікації вірусу гепатиту С, в той час, як у ВІЛ/ВГВ-коінфікованих осіб частота виявлення активної реплікації вірусу гепатиту В була


8-09-2015, 23:24